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贰尝滨厂础试剂盒使用及开发过程中常见问题及对策

 更新时间:2013-12-17    点击量:4102

 

现象

可能原因

解决方法

板条不显色或者无相应数值

试剂使用顺序混乱,或操作步骤出错

严格遵循实验说明重复实验

使用了不同批次的试剂

确保试剂来自同一试剂盒

板条受潮严重

板条要封好,干燥剂失效要及时更换

OD

试剂过期,或者不同的批次混用

查证过期试剂和批次

洗液配制错误、洗涤浸泡时间过长

按照说明书要求洗涤,并正确配制洗液

孵育时间过短

按照说明书要求,严格计算好时间

试剂污染

确保吸取不同液体更换新的枪头和盛放器皿

试剂温度过低

根据试剂体积大小回温时间相应延长,确保试剂*回温

使用错误波长读数,或者酶

标仪失灵

确保450 nm波长读数,检查酶标仪是否故障

试剂盒处于的条件

使用完毕的部分请立即放回冰箱,勿置于过热环境时间太长

过高的

背景值或吸光度(OD值)

使用了质量差的水配制试剂

使用双蒸水或去离子水配制试剂

洗涤不当或者洗板机洗板效果不好

增加1-2次洗涤,每孔至少加入250μL洗液

酶标仪失灵,如OD值读数很高而颜色很浅

使用校正微孔板检查酶标仪,检查光源

实验室温度过高,反应时间过长

测定操作温度是否合适,时间是否计算正确

试剂混淆,被污染或者配制不当

确保使用正确的试剂,准确配制,避免污染

板内

差异性

加入标准品和样品等的时间不一致

使用多道枪加样,同种试剂加样途中不能中断

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

洗涤系统出现故障

检查洗涤系统,保持良好运行

板与板_x0008__x0008_之间孵育时间相差太大

独立计时,确保一致的孵育时间

板与板_x0008__x0008_之间不一致的洗涤过程

确保相同的洗涤次数,保证洗涤系统正常运作

使用移液枪不当

检查移液枪,确保吸取相同液量

试剂和样品处于不同温度

确保盒内试剂和样品液等充分回温,如果试剂体积较大则需要回温较长时间。不能用温水浴回温样品

不同批次的试剂混用,或试剂盒过期

试剂不要混用,通常0标准品的OD值小于0.5显示试剂质量下降

一个或

多个标准品数据点超出曲线范围

标准品添加顺序混乱,或者放置于错误位置

按照说明要求重复实验,保证标准品添加正确

标准品被污染或与其他标准品混淆

改用新的标准品,按照由低浓度到高浓度的顺序添加标准品

洗涤不一致或者洗涤系统失灵

遵循一如既往的洗涤方式,检查洗涤系统

加入标准品和试剂的时间不一致

由低到高浓度依次添加标准品,使用多道枪移液

多道枪使用不当

校准多道枪,检查吸嘴是否套紧,确保吸液量一致

 

 

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